La mancha negra de los cítricos: actualidad y desafíos

1.1. Síntomas que ocasiona

Los daños ocasionados por P. citricarpa en el cultivo de los cítricos, pueden manifestarse en hojas y ramas. Sin embargo, las lesiones fundamentales se producen en la corteza de los frutos (Fig. 1), provocando incluso su caída prematura, cuando la carga de inóculo es elevada.

La severidad de los síntomas depende de factores como la susceptibilidad de la especie y el cultivar cítrico, la madurez del fruto, la edad de la planta y las condiciones ambientales en el momento en que se desarrolle la infección. Adicionalmente, frutos asintomáticos con infecciones latentes pueden desarrollar síntomas durante el transporte o el almacenamiento. No obstante, aunque la apariencia del fruto se ve comprometida, la calidad del jugo no se afecta (1515. Wulandari N, To A, Hyde K, Duong L, Gruyter M de. Phyllosticta citriasiana sp. nov.; the cause of Citrus spot of Citrus maxima in Asia. Fungal Divers. 2009; 34: 23-39. http://www.fungaldiversity.org/fdp/sfdp/FD34-2.pdf , 2727. Schreuder W, Plooy W du, Erasmus A, Savage C, Basson E, Lennox C, Fourie PH. Postharvest fungicide treatments and cold storage control citrus black spot infections. Crop Prot. 2018; 112, 332-342. https://doi.org/10.1016/j.cropro.2018.06.020 ).

1.2. Impacto económico

Los síntomas presentes en los frutos afectados por la MNC perjudican su calidad cosmética, lo que limita sus posibilidades de exportación. En adición, la caída prematura de los frutos, originada por una elevada presión de inóculo, así como los altos costos asociados al manejo de la enfermedad, afectan negativamente la economía de los países exportadores (66. EFSA (European Food Safety Authority), Parnell S, Schenk M, Schrader G, Vicent A, Delbianco A, Vos S. Pest survey card on Phyllosticta citricarpa. 2020; 1863: 35. https://doi.org/10.2903/sp.efsa.2020.EN-1863 ).

En Estados Unidos se estima que, el costo para el manejo de la MNC, puede ascender a 220 millones de dólares cada año; mientras que, las pérdidas económicas en la Florida pueden alcanzar los 847 millones (3131. Holtz, T. Risk assessment of Citrus spp. fruit as a pathway of the introduction of Guignardia citricarpa Kiely, the organism that causes citrus black spot disease. 2010. Disponible en: http://www.aphis.usda.gov/plant_health/plant_pest_info/citrus/downloads/black_spot/cbsrisk-assessment.pdf. Consulta: 18 de febrero 2022). Adicionalmente, en Sudáfrica, el manejo anual de la enfermedad asciende a 190 millones de euros. Este elevado presupuesto puede ser asumido, actualmente, por la industria citrícola, pero con implicaciones en las oportunidades de empleo y afectaciones al consumidor, debido al aumento del precio de la fruta fresca. Esta situación repercute de forma significativa en la economía del país, pues la producción de cítricos genera alrededor de 10 000 nuevos empleos al año e ingresos significativos por la exportación de fruta fresca (88. Jansen C. Staggering’ financial and management costs of CBS measures are disproportionate to the risk. Rigid EU stance on CBS overburdens South African citrus industry. FreshPlaza. 2018; 176: 45-47.).

Por estos motivos, P. citricarpa, se considera en muchos países un patógeno cuarentenado (77. EPPO (European and Mediterranean Plant Protection Organization). EPPO Reporting Service no. 07 - 2019 2019/141 First report of Phyllosticta citricarpa in Tunisia. 2019. Disponible: https://gd.eppo.int/reporting/article-6571. Consulta: 18 de febrero 2022). En la Unión Europea está registrado como una plaga cuarentenaria A1 y se prohíben las importaciones de cítricos con sospechas de la enfermedad (66. EFSA (European Food Safety Authority), Parnell S, Schenk M, Schrader G, Vicent A, Delbianco A, Vos S. Pest survey card on Phyllosticta citricarpa. 2020; 1863: 35. https://doi.org/10.2903/sp.efsa.2020.EN-1863 ). En este sentido, durante el periodo 2017 - 2018, se rechazaron 31 lotes de fruta fresca provenientes de Argentina, Brasil y Sudáfrica debido a la identificación de P. citricarpa en los mismos (88. Jansen C. Staggering’ financial and management costs of CBS measures are disproportionate to the risk. Rigid EU stance on CBS overburdens South African citrus industry. FreshPlaza. 2018; 176: 45-47.).

En Cuba, luego del informe de la MNC en la región de Jagüey Grande, Matanzas, se manifestaron todas estas afectaciones económicas y en la actualidad se dificulta la exportación de fruta fresca hacia países de la Unión Europea. Las mayores pérdidas se encontraron en limoneros y naranjos de maduración tardía, que resultan los más susceptibles a la enfermedad y tienen una elevada presencia en la citricultura cubana (44. Hidalgo EI, Pérez LV. Diferenciación morfológica, cultural y biológica de Guignardia citricarpa y Guignardia mangiferae en frutos cítricos de Cuba. Fitosanidad. 2010: 14(3): 141-152. ).

2.1. Taxonomía polifásica para la identificación de especies del género Phyllosticta

La primera especie del género Phyllosticta descrita en cítricos fue P. citricarpa, dada su importancia como agente causal de la MNC (Tabla 1). Los métodos convencionales utilizados para su identificación se basan en el análisis del diámetro de la colonia en PDA, talla de los conidios, espesor de la vaina mucoide, longitud del apéndice conidial y presencia o no de pigmento amarillo en Agar Avena. Adicionalmente, las técnicas moleculares empleadas para la caracterización de esta especie se basan en el análisis de las regiones del ADN ribosomal que contiene los espaciadores internos transcritos (ITS, del inglés: Internal Transcribed Spacer; ITS1-5.8S-ITS2) y la subunidad larga 28S del ADNr (LSU, del inglés: Large Subunit). Asimismo, fragmentos de los genes que codifican para el factor de elongación de la traducción 1 (tef1), actina (actA) y gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenasa (gapdh) (55. Guarnaccia V, Groenewald J, Li H, Glienke C, Carstens E, Hattingh V, et al. First report of Phyllosticta citricarpa and description of two new species; P. paracapitalensis and P. paracitricarpa, from citrus in Europe. Stud. Mycol. 2017: 87(1): 161-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.simyco.2017.05.003 , 3333. Marin-Felix Y, Hernández R, Wingfield M, Akulov A, Carnegie A, Cheewangkoon R, et al. Genera of phytopathogenic fungi: GOPHY 2. Stud. Mycol. 2019; 92: 47-133. https://doi.org/10.1016/j.simyco.2018.04.002.).

La especie Phyllosticta capitalensis Henn., se describió posteriormente, al definirse que los aislados considerados, inicialmente, como cepas no patogénicas de P. citricarpa, son hongos endófitos que no ocasionan síntomas en cítricos y constituyen una especie diferente al agente causal de la MNC (1616. Glienke C, Pereira OL, Stringari D, Fabris J, Kava CV, Galli TL, et al. Endophytic and pathogenic Phyllosticta species, with reference to those associated with Citrus Black Spot. Persoonia. 2011; 26: 47-56. https://doi.org/10.3767/003158511X569169 ). (Tabla 1)

Mediante la taxonomía polifásica se describieron nuevas especies de Phyllosticta asociadas a cítricos. Phyllosticta citriasiana Wulandari, Crous & Gruyter, Phyllosticta citrichinaensis X.H. Wang, K.D. Hyde & H.Y. Li y Phyllosticta citrimaxima Wikee, Crous, K.D. Hyde & McKenzie, se identificaron en Asia. Hasta la fecha estas no son cuarentenadas y se consideran patógenos débiles (1515. Wulandari N, To A, Hyde K, Duong L, Gruyter M de. Phyllosticta citriasiana sp. nov.; the cause of Citrus spot of Citrus maxima in Asia. Fungal Divers. 2009; 34: 23-39. http://www.fungaldiversity.org/fdp/sfdp/FD34-2.pdf , 1717. Wang X, Chen G, Huang F, Zhang J, Hyde KD, Li H. Phyllosticta species associated with citrus diseases in China. Fungal Divers. 2012. https://doi.org/10.1007/s13225-011-0140-y , 1818. Wikee S, Lombard L, Nakashima C, Motohashi K, Chukeatirote E, Cheewangkoon R, et al. A phylogenetic re-evaluation of Phyllosticta (Botryosphaeriales). Stud. Mycol. 2013; 76: 1-29.). De igual forma, Guarnaccia et al. (55. Guarnaccia V, Groenewald J, Li H, Glienke C, Carstens E, Hattingh V, et al. First report of Phyllosticta citricarpa and description of two new species; P. paracapitalensis and P. paracitricarpa, from citrus in Europe. Stud. Mycol. 2017: 87(1): 161-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.simyco.2017.05.003 ), informaron la especie Phyllosticta paracitricarpa Guarn. & Crous en cítricos de Europa, al tiempo que plantearon la necesidad de profundizar en estudios sobre su patogenicidad (Tabla 1). Además, las especies endófitas Phyllosticta citribraziliensis O.L. Pereira, Glienke & Crous y Phyllosticta paracapitalensis Guarn. & Crous también se describieron en cítricos (55. Guarnaccia V, Groenewald J, Li H, Glienke C, Carstens E, Hattingh V, et al. First report of Phyllosticta citricarpa and description of two new species; P. paracapitalensis and P. paracitricarpa, from citrus in Europe. Stud. Mycol. 2017: 87(1): 161-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.simyco.2017.05.003 , 1616. Glienke C, Pereira OL, Stringari D, Fabris J, Kava CV, Galli TL, et al. Endophytic and pathogenic Phyllosticta species, with reference to those associated with Citrus Black Spot. Persoonia. 2011; 26: 47-56. https://doi.org/10.3767/003158511X569169 , 1818. Wikee S, Lombard L, Nakashima C, Motohashi K, Chukeatirote E, Cheewangkoon R, et al. A phylogenetic re-evaluation of Phyllosticta (Botryosphaeriales). Stud. Mycol. 2013; 76: 1-29.). (Tabla 1)

El uso de la taxonomía polifásica para la identificación de las especies del género Phyllosticta, presenta gran relevancia para la agricultura. Esta ha permitido la descripción de un complejo de especies asociadas a cítricos, con gran semejanza en cuanto a las características morfológicas (Tabla 1) y los síntomas que ocasionan, por lo que dificultan el diagnóstico de la MNC. Por ejemplo, el Nuevo Grupo Asesor de Plagas del Departamento de Agricultura de Estados Unidos, reconoció que en el año 2012 se rechazaron más de 40 envíos de frutos de Citrus maxima proveniente de Asia. En ellos se diagnosticó la presencia Phyllosticta citricarpa sin el empleo de esta metodología de avanzada. Considerando la situación taxonómica actual, el hongo identificado pudo ser en realidad P. citriasiana, lo que se traduce en pérdidas financieras innecesarias para los exportadores (3434. Ferguson, L; Prokrym, D. 2012. Phyllosticta citriasiana. The USDA APHIS Plant Protection and Quarantine. New Pest Advisory Group. Report 20121109.). Asimismo, estos nuevos conocimientos han impulsado el desarrollo de métodos moleculares para el diagnóstico de la MNC (1919. Lugo Alvares MB, Manzano León AM. Métodos empleados para el diagnóstico de la enfermedad mancha negra de los cítricos. CitriFrut. 2016; 33(1): 37-45.).

El empleo de la taxonomía polifásica en Cuba permitió confirmar la presencia de P. citricarpa y P. capitalensis, en plantaciones citrícolas de Matanzas, Cienfuegos y Camagüey, con presencia de MNC. Adicionalmente, se detectó P. citricarpa en plantas de cítricos, de huertos particulares en Santiago de Cuba (1414. Serra W, Lugo Álvarez MB, García Rodríguez D, Alonso-Oliva E, Sanz Llorente A, Guarnaccia V, et al. Polyphasic identification and MAT1-2 isolates of Phyllosticta citricarpa in Cuba. Eur. J. of Plant Pathol. 2022. https://doi.org/10.1007/s10658-021-02453-y ). Es preciso destacar que, la no detección hasta el momento, de otras especies de Phyllosticta sp. en plantaciones de cítricos, no permite descartar su presencia en Cuba. Los resultados obtenidos contribuyen al diagnóstico y manejo del patógeno, así como a la toma de decisiones relacionadas con la exportación de fruta fresca.

2.2. Ciclo de vida de Phyllosticta citricarpa y epidemiología de la enfermedad

P. citricarpa presenta en su ciclo de vida dos estados, uno sexual y otro asexual, durante los cuales se producen ascosporas y conidios, respectivamente. Ambos tipos de esporas pueden causar infección en órganos susceptibles de los cítricos (1111. Silva GJJ, Feichtenberger E, Spósito MB, Amorim L, Bassanezi RB, Goes A de. Pinta preta dos citros: a doença e seu manejo. Fundo de Defesa da Citricultura. Araraquara: Fundecitros. 2016; 208 pp. ISBN: 9788568170021 Disponible: www.fundecitrus.com.br Consulta: 18 de febrero 2022, 3535. Tran NT, Miles A, Smith MW, Dietzgen RG, Drenth A. Pathogenicity of Phyllosticta citricarpa ascospores on Citrus spp. Plant. Dis. 2018; 102: 1386-1393. https://doi.org/10.1094/PDIS-08-17-1331-RE ).

Las ascosporas se producen en la hojarasca y requieren del apareamiento entre tipos sexuales opuestos (idiomorfos MAT1-1 y MAT1-2), por ser P. citricarpa una especie heterotálica (1010. Wang N, Zhang K., Huguet-Tapia J, Rollins J, Dewdney M. Mating type and simple sequence repeat markers indicate a clonal population of Phyllosticta citricarpa in Florida. Phytopathology. 2016; 106: 1300-1310. https://doi.org/10.1094/PHYTO-12-15-0316 ). Estas esporas pueden dispersarse a través de corrientes de aire a distancias de hasta 25 m. Se consideran, por tanto, el inóculo primario de la enfermedad y las responsables de introducir la MNC a nuevas áreas de siembra. Los conidios, por otro lado, se desarrollan en los picnidios presentes en frutas, ramas y hojas infectadas, a la vez que se dispersan a cortas distancias mediados por salpicaduras de agua. Ellos se consideran el inóculo secundario de la MNC y se relacionan con el incremento de la enfermedad en el propio árbol y en árboles cercanos (1212. Guarnaccia V, Gehrmann T, Silva-Junior G, Fourier P, Haridas S, Vu D, et al. Phyllosticta citricarpa and sister species of global importance to Citrus. Mol. Plant Pathol. 2019; 20: 1619-1635. https://doi.org/10.1111/mpp.12861 ).

La importancia relativa de cada tipo de espora en la epidemiología de la enfermedad depende de las condiciones ambientales de cada región. Así, en Sudáfrica y Australia, las ascosporas de P. citricarpa son las principales responsables de las epidemias; mientras que, a los conidios no se les atribuye importancia epidemiológica significativa. Ello se debe a que, en las condiciones de clima subtropical, las lluvias se limitan al verano y ocurre un florecimiento y fructificación uniforme en el año. Adicionalmente, no coexisten frutos sintomáticos con frutos jóvenes y susceptibles, pues se realiza una cosecha exhaustiva antes del siguiente periodo de floración y producción (66. EFSA (European Food Safety Authority), Parnell S, Schenk M, Schrader G, Vicent A, Delbianco A, Vos S. Pest survey card on Phyllosticta citricarpa. 2020; 1863: 35. https://doi.org/10.2903/sp.efsa.2020.EN-1863 ).

A diferencia de lo expresado anteriormente, en países tropicales como Brasil, el periodo de lluvia abarca varias estaciones, ocurren varias floraciones durante el año y coexisten, simultáneamente, frutos enfermos y frutos susceptibles. Por tanto, en estas condiciones, ambos tipos de propágulos contribuyen significativamente al desarrollo de la enfermedad (3030. Spósito MB, Amorim L, Bassanezi RB, Yamamoto P, Felippe MR, Czermainski A. Relative importance of inoculum sources of Guignardia citricarpa on the citrus black spot epidemic in Brazil. Crop Prot. 2011; 30: 1546-1552. https://doi.org/10.1016/j.cropro.2011.08.007.).

Cabe destacar que el reciente análisis de los genes MAT (tipo sexual) evidenció que el ciclo de la MNC mundialmente aceptado no se cumple en todas las regiones citrícolas. En este sentido, se demostró que en Australia, Brasil, Sudáfrica y China coexisten los dos tipos sexuales compatibles, y se cumple lo explicado anteriormente (2424. Carstens E, Linde C, Slabbert R, Miles A, Donovan N, Li H, et al. A Global Perspective on the Population Structure and Reproductive System of Phyllosticta citricarpa. Phytopathology. 2017; 107(6): 758-768. https://doi.org/10.1094/PHYTO-08-16-0292-R ). Sin embargo, en la Florida (Estados Unidos), Cuba, Italia, Malta y Portugal, solo se identificó la presencia de uno de los tipos sexuales. Ello demuestra la existencia de un ciclo atípico en estas regiones, donde solo ocurre la reproducción asexual del patógeno y los conidios, que normalmente constituyen el inóculo secundario, son la única fuente de inóculo (55. Guarnaccia V, Groenewald J, Li H, Glienke C, Carstens E, Hattingh V, et al. First report of Phyllosticta citricarpa and description of two new species; P. paracapitalensis and P. paracitricarpa, from citrus in Europe. Stud. Mycol. 2017: 87(1): 161-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.simyco.2017.05.003 , 1010. Wang N, Zhang K., Huguet-Tapia J, Rollins J, Dewdney M. Mating type and simple sequence repeat markers indicate a clonal population of Phyllosticta citricarpa in Florida. Phytopathology. 2016; 106: 1300-1310. https://doi.org/10.1094/PHYTO-12-15-0316 , 1414. Serra W, Lugo Álvarez MB, García Rodríguez D, Alonso-Oliva E, Sanz Llorente A, Guarnaccia V, et al. Polyphasic identification and MAT1-2 isolates of Phyllosticta citricarpa in Cuba. Eur. J. of Plant Pathol. 2022. https://doi.org/10.1007/s10658-021-02453-y ).

Entre las cinco regiones con ciclo de vida atípico de P. citricarpa, destacan la Florida y Cuba, por presentar las condiciones para el desarrollo de la MNC. En ellas se detectó la sola presencia del idiomorfo MAT1-2 (55. Guarnaccia V, Groenewald J, Li H, Glienke C, Carstens E, Hattingh V, et al. First report of Phyllosticta citricarpa and description of two new species; P. paracapitalensis and P. paracitricarpa, from citrus in Europe. Stud. Mycol. 2017: 87(1): 161-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.simyco.2017.05.003 , 1414. Serra W, Lugo Álvarez MB, García Rodríguez D, Alonso-Oliva E, Sanz Llorente A, Guarnaccia V, et al. Polyphasic identification and MAT1-2 isolates of Phyllosticta citricarpa in Cuba. Eur. J. of Plant Pathol. 2022. https://doi.org/10.1007/s10658-021-02453-y , 1313. Coetzee B, Carstens E, Dewdney M, Fourie PH, Bester-van der Merwe AE. Extending the knowledge of Phyllosticta citricarpa population structure in USA with re-sequencing and genome wide analysis. Physiol. Mol. 2021; 113: 101591. https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2020.101591 ). Cabe destacar que la dispersión a corta distancia de los conidios, concuerda con en el patrón espacial agregado de la enfermedad identificado en estas regiones (3636. Gómez-Montes de Oca A, Alonso-Oliva E, Aranguren-González M, González- Rodríguez AI, Bravo-Pérez I. Evaluación de estrategias de manejo para el control de la mancha negra de los cítricos causada por Guignardia citricarpa Kiely en la región de Jagüey Grande. CitriFrut. 2012; 29(2): 40-45., 3737. Hendricks M, Christman M, Roberts PD. Spatial and temporal patterns of commercial citrus trees affected by Phyllosticta citricarpa in Florida. Sci. Rep. 2017; 7, 1641. http://dx.doi.org/10.1038/s41598-017-01901-2 ). No obstante, se constató también la dispersión de la enfermedad, hacia nuevas zonas citrícolas, por lo que el análisis de este fenómeno sugirió nuevos elementos sobre la diseminación de la enfermedad en estas condiciones.

En este sentido, la acción del hombre puede haber desempeñado una función fundamental en la dispersión de la enfermedad en regiones con ausencia de reproducción sexual del patógeno. Ello concuerda con lo expresado por Alonso (2828. Alonso-Oliva, E. Caracterización de síntomas y estrategia de control de la mancha negra de los frutos cítricos (Guignardia citricarpa Kiely) en Jagüey Grande. [Tesis de Maestría]. 2010. Instituto de Investigaciones en Fruticultura Tropical, Jaguey Grande, Matanzas, Cuba. 68 pp.), quien detectó una mayor incidencia de la MNC en las unidades empresariales de Jagüey Grande, que se encontraban más expuestas al movimiento de vehículos y personal. Adicionalmente, estudios recientes sugieren que los conidios no solo se dispersan hasta 0,8 m por las salpicaduras de agua, sino que la combinación de la lluvia y el viento (25 km.h^-1) pudiera desplazarlos a mayores distancias (8 m). También, se propuso que los huracanes y tormentas tropicales pudieran transportar ramas infectadas (con o sin frutos) a trayectos más largos y propagar así la enfermedad MNC (3737. Hendricks M, Christman M, Roberts PD. Spatial and temporal patterns of commercial citrus trees affected by Phyllosticta citricarpa in Florida. Sci. Rep. 2017; 7, 1641. http://dx.doi.org/10.1038/s41598-017-01901-2 , 3838. Hendricks KE, Christman, M, Roberts PD. The Effect of Weather and Location of Fruit within the Tree on the Incidence and Severity of Citrus Black Spot on Fruit. Scientific Report. 2020;10: 1389. http://dx.doi.org/10.1038/s41598-020-58188-z ).

Estos datos indican que el estudio de la distribución de los tipos sexuales de P. citricarpa en regiones citrícolas, debe tomarse en consideración para la implementación de una estrategia de manejo más precisa y económica de la MNC.

3.1. Manejo cultural

P. citricarpa se puede introducir en áreas de cultivos de cítricos mediante material de propagación infectado. En un esfuerzo por prevenir estos incidentes, se instituyen regulaciones de cuarentena vegetal y requisitos comerciales entre diferentes regiones o países. En este sentido, al establecer nuevos huertos, es imprescindible el empleo de plantas certificadas. Estas medidas son vitales pues se informó, en países como Sudáfrica y Zimbabue, la propagación de la enfermedad a partir de viveros que estaban infectados y no manifestaban síntomas (1212. Guarnaccia V, Gehrmann T, Silva-Junior G, Fourier P, Haridas S, Vu D, et al. Phyllosticta citricarpa and sister species of global importance to Citrus. Mol. Plant Pathol. 2019; 20: 1619-1635. https://doi.org/10.1111/mpp.12861 ).

Asimismo, las plantas que se encuentran en mal estado resultan más susceptibles a desarrollar la MNC, por lo que las acciones dedicadas al fortalecimiento de las plantaciones contribuyen a la disminución de la incidencia de la enfermedad. En ello resulta importante el uso de un programa de fertilizaciones y riego, que garanticen el buen estado nutricional de las plantas (3636. Gómez-Montes de Oca A, Alonso-Oliva E, Aranguren-González M, González- Rodríguez AI, Bravo-Pérez I. Evaluación de estrategias de manejo para el control de la mancha negra de los cítricos causada por Guignardia citricarpa Kiely en la región de Jagüey Grande. CitriFrut. 2012; 29(2): 40-45., 3939. Dewdney MM, Schubert TS, Estes MR, Roberts PD, Peres NA. Citrus black spot. En: Diepenbrock, L.M., Dewdney, M.M. and Vashisth, T., (ed). Florida Citrus Production Guide. pp. 129-134. Gainesville: University of Florida, Institute of Food and Agricultural Services. 2018.).

Para el control de la fuente de inóculo conidial se hace énfasis en la cosecha del total de los frutos previo a la siguiente floración, así como en el saneamiento, que incluye la eliminación de ramas secas, de frutos remanentes y de plantas en mal estado sanitario o de nutrición (3636. Gómez-Montes de Oca A, Alonso-Oliva E, Aranguren-González M, González- Rodríguez AI, Bravo-Pérez I. Evaluación de estrategias de manejo para el control de la mancha negra de los cítricos causada por Guignardia citricarpa Kiely en la región de Jagüey Grande. CitriFrut. 2012; 29(2): 40-45.).

Otro aspecto que requiere de un análisis especial es el transporte de frutos sintomáticos. En muchos casos se considera que estos no constituyen una vía real de propagación de la MNC a nuevas áreas. Ello se basa, fundamentalmente, en que los conidios son las únicas esporas que se producen sobre los frutos enfermos. Estos presentan corto tiempo de vida media, poca capacidad de germinación y solo se dispersan a cortas distancias por salpicaduras de agua (1212. Guarnaccia V, Gehrmann T, Silva-Junior G, Fourier P, Haridas S, Vu D, et al. Phyllosticta citricarpa and sister species of global importance to Citrus. Mol. Plant Pathol. 2019; 20: 1619-1635. https://doi.org/10.1111/mpp.12861 ). No obstante, se demostró que la adición de frutos sintomáticos a plantaciones libres de MNC reproduce la enfermedad en las zonas cercanas a la fuente de inóculo (3030. Spósito MB, Amorim L, Bassanezi RB, Yamamoto P, Felippe MR, Czermainski A. Relative importance of inoculum sources of Guignardia citricarpa on the citrus black spot epidemic in Brazil. Crop Prot. 2011; 30: 1546-1552. https://doi.org/10.1016/j.cropro.2011.08.007.). Por tanto, se debe controlar su transporte, y el de otras fuentes de conidios, hacia las áreas citrícolas.

Otra de las medidas clave comprende el tratamiento de la hojarasca para el control de las ascosporas (esporas sexuales) como inóculo primario de la enfermedad (3030. Spósito MB, Amorim L, Bassanezi RB, Yamamoto P, Felippe MR, Czermainski A. Relative importance of inoculum sources of Guignardia citricarpa on the citrus black spot epidemic in Brazil. Crop Prot. 2011; 30: 1546-1552. https://doi.org/10.1016/j.cropro.2011.08.007.). Sin embargo, esta medida presenta menor impacto en la Florida y en Cuba, por la ausencia de reproducción sexual del patógeno. No obstante, se puede valorar su empleo para el control de conidios de P. citricarpa y para el manejo de otras enfermedades fungosas que afectan cítricos (ej: mancha grasienta y antracnosis).

Adicionalmente, deben desinfectarse los medios de cosecha y transporte del campo con amonio cuaternario al 2 %. Asimismo, es necesario eliminar todos los restos de cosecha en las envasadoras, industrias y plantas de beneficios (3636. Gómez-Montes de Oca A, Alonso-Oliva E, Aranguren-González M, González- Rodríguez AI, Bravo-Pérez I. Evaluación de estrategias de manejo para el control de la mancha negra de los cítricos causada por Guignardia citricarpa Kiely en la región de Jagüey Grande. CitriFrut. 2012; 29(2): 40-45.).

3.2. Manejo químico

Los fungicidas desempeñan una función decisiva en el manejo de la MNC y su efectividad depende de que se apliquen apropiadamente. Para esto se deben considerar aspectos como su mecanismo de acción, la concentración mínima inhibitoria, el mecanismo de dispersión más efectivo y la distribución de la enfermedad en el cultivo (4040. Alonso-Oliva E, Aranguren GM, Gómez MO, González BF, Are AE, Manzano AM. Estrategia de control de la mancha negra de los frutos cítricos (Phyllosticta criticarpa (McAlpine) Aa.) y otras enfermedades fungosas en Jagüey Grande, Cuba. V Simposio Internacional de Fruticultura Tropical y Subtropical2017. Disponible en: http://riacnet.net/wp-content/uploads/2017/10/16-Estrategia-de-control-de-la-mancha-negra . Consulta 18 de febrero 2022).

El momento propicio para la infección por P. citricarpa tiene lugar durante el periodo de susceptibilidad de los frutos, que abarca de cinco a seis meses después de la caída de los pétalos. Este marco de tiempo es el más adecuado para la aplicación de fungicidas preventivos o de contacto. También, se pueden realizar tratamientos de posinfección con el objetivo de manejar el inóculo que escapó a la primera aplicación de fungicidas (2020. Dewdney MM, Walker C, Roberts PD, Peres NA. 2021-2022 Florida Citrus Production Guide: Citrus Black Spot. PP279, series of the Plant Pathology Department, Florida Cooperative Extension Service, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. 2021. https://doi.org/10.32473/edis-cg088-2021., 4141. Moyo P, van Niekerk JM, Fourie PH. Updated citrus black spot spray programs 2018-2019. CRI Cutting Edge. 2018; 254: 1-21., 4242. Lanza FE, Metzker TG, Vinhas T, Behlau F, Silva-Junior GJ. Critical fungicide spray period for Citrus Black Spot control in São Paulo State. Brazil. Plant Dis. 2018; 102: 334-340. https://doi.org/10.1094/PDIS-04-17-0537-RE .).

En numerosos países, entre los que se destacan Estados Unidos, Brasil y Australia, el manejo químico se basa, fundamentalmente, en aplicaciones mensuales, en las que se alternan productos derivados del cobre y estrobilurinas. El uso de las estrobilurinas se recomienda a temperaturas superiores a 34°C, cuando la fitotoxicidad del cobre constituye una preocupación. No se pueden aplicar más de cuatro veces al año y no se recomiendan aplicaciones consecutivas debido al posible desarrollo de resistencia (2020. Dewdney MM, Walker C, Roberts PD, Peres NA. 2021-2022 Florida Citrus Production Guide: Citrus Black Spot. PP279, series of the Plant Pathology Department, Florida Cooperative Extension Service, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. 2021. https://doi.org/10.32473/edis-cg088-2021.).

En Cuba se establece un control químico diferencial, donde se tiene en cuenta si el área con incidencia de MNC va a ser destinada a la industria o a la exportación de fruta fresca. En el primer caso, se recomienda realizar tres aplicaciones de productos, con vistas a reducir la presión de inóculo y con ello minimizar la caída prematura de los frutos. Para el segundo caso, resulta imprescindible la realización de cuatro aplicaciones y de una quinta opcional, lo que posibilita la exportación de fruta fresca libre de MNC (4040. Alonso-Oliva E, Aranguren GM, Gómez MO, González BF, Are AE, Manzano AM. Estrategia de control de la mancha negra de los frutos cítricos (Phyllosticta criticarpa (McAlpine) Aa.) y otras enfermedades fungosas en Jagüey Grande, Cuba. V Simposio Internacional de Fruticultura Tropical y Subtropical2017. Disponible en: http://riacnet.net/wp-content/uploads/2017/10/16-Estrategia-de-control-de-la-mancha-negra . Consulta 18 de febrero 2022).

Los fungicidas de contacto recomendados tradicionalmente en nuestro país para el control de la MNC son oxicloruro de cobre (Cuproflow SC 37,75), mancozeb (Mancozeb PH 80) y aceite mineral (Aceite de Sigatoka). Se han empleado también productos de acción sistémica que presentan los ingredientes activos: benomilo (Benomyl PH 50), carbendacima (Curacarb 50 % PH) y tebuconazol + procloraz (Supreme EW 40). Recientemente se demostró la efectividad de tratamientos con oxicloruro de cobre (Cuproflow SC 37,75) y las estrobilurinas piraclostrobina (Regnum EC 25) o trifloxistrobina + ciproconazol (Sphere Max SC 535), para reducir significativamente la incidencia y severidad de la enfermedad (4040. Alonso-Oliva E, Aranguren GM, Gómez MO, González BF, Are AE, Manzano AM. Estrategia de control de la mancha negra de los frutos cítricos (Phyllosticta criticarpa (McAlpine) Aa.) y otras enfermedades fungosas en Jagüey Grande, Cuba. V Simposio Internacional de Fruticultura Tropical y Subtropical2017. Disponible en: http://riacnet.net/wp-content/uploads/2017/10/16-Estrategia-de-control-de-la-mancha-negra . Consulta 18 de febrero 2022).

Es de destacar que muchos de los productos que se aplican para el control de la MNC resultan también efectivos contra enfermedades fungosas como la antracnosis, melanosis y mancha grasienta, causadas por Colletotrichum spp., Zasmidium citri-griseum (F.E. Fisher) U. Braun & Crous y Diaporthe citri (HS Fawc.) FA Wolf, respectivamente. Estas deben ser controladas de igual forma para garantizar la exportación de fruta fresca, por lo que la estrategia de manejo debe diseñarse de manera que influya sobre las distintas infecciones ocasionadas por hongos fitopatógenos (2020. Dewdney MM, Walker C, Roberts PD, Peres NA. 2021-2022 Florida Citrus Production Guide: Citrus Black Spot. PP279, series of the Plant Pathology Department, Florida Cooperative Extension Service, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. 2021. https://doi.org/10.32473/edis-cg088-2021.).

3.3. Control biológico

La utilización de sistemas biológicos para el manejo de fitopatógenos constituye una alternativa ecológica y económica ante la problemática relacionada con el empleo de fungicidas. Estos se basan en el uso de productos biológicos que posibilitan la reducción del inóculo del patógeno a valores del umbral de la enfermedad económicamente aceptables. Cabe destacar que el empleo de los bioproductos no ha permitido la sustitución de los fungicidas para el control eficiente de la MNC, por lo que se recomiendan como complemento a las estrategias de manejo tradicionales (2222. Kupper KC, Barbosa CE, Moretto C, Bettiol W, Goes A de. Control of Guignardia citricarpa by Bacillus subtilis and Trichoderma spp. Rev. Bras. Frutic. 2011; 33(4): 1111-1118. https://doi.org/10.1590/S010029452011000400009., 2323. Serra W. Caracterización de cepas de Phyllosticta citricarpa que afectan plantaciones citrícolas de Cuba. [Tesis de Maestría]. 2019. Universidad de La Habana, La Habana, Cuba. 62 pp.).

Una gran variedad de especies microbianas, se evaluaron como agentes de biocontrol para el manejo de la MNC, por su marcada capacidad de afectar o inhibir el crecimiento de P. citricarpa, así como por contribuir al fortalecimiento nutricional de las plantas (1212. Guarnaccia V, Gehrmann T, Silva-Junior G, Fourier P, Haridas S, Vu D, et al. Phyllosticta citricarpa and sister species of global importance to Citrus. Mol. Plant Pathol. 2019; 20: 1619-1635. https://doi.org/10.1111/mpp.12861 , 4848. Tran NT, Miles AK, Dietzgen RG, Drenth A. Phyllosticta capitalensis and P. paracapitalensis are endophytic fungi that show potential to inhibit pathogenic P. citricarpa on citrus. Australas Plant Path. 2019; 48: 281-296. https://dx.doi.org/10.1007/s13313-019-00628-0 ). Entre las más destacadas se encuentran las del género Trichoderma, debido a su eficaz control, capacidad reproductiva, plasticidad ecológica, efecto estimulante sobre los cultivos y su acción como inductor de resistencia sistémica en la planta ante diversos patógenos (2323. Serra W. Caracterización de cepas de Phyllosticta citricarpa que afectan plantaciones citrícolas de Cuba. [Tesis de Maestría]. 2019. Universidad de La Habana, La Habana, Cuba. 62 pp., 4949. Sumida CH, Daniel FS, Paul SC, Douglas A, Peitl C, Abreu LM, et al. Trichoderma asperelloides antagonism to nine Sclerotinia sclerotiorum strains and biological control of white mold disease in soybean plants. Biocontrol Sci. Technol. 2018; 28(2): 142-156. https://doi.org/10.1080/09583157.2018.1430743 , 5050. Uddin MN, Rahman U, Khan W, Uddin N, Muhammad M. Effect of Trichoderma harzianum on tomato plant growth and its antagonistic activity against Phythium ultimum and Phytopthora capsici. Egypt. J. Biol. Pest Control. 2018; 28. https://dx.doi.org/10.1186/s41938-018-0032-5.). Estos alentadores resultados se alcanzaron, mayoritariamente, a escala de laboratorio o en pequeños ensayos de campo, por lo que se trabaja para su incorporación al manejo de plantaciones afectadas por la MNC (1111. Silva GJJ, Feichtenberger E, Spósito MB, Amorim L, Bassanezi RB, Goes A de. Pinta preta dos citros: a doença e seu manejo. Fundo de Defesa da Citricultura. Araraquara: Fundecitros. 2016; 208 pp. ISBN: 9788568170021 Disponible: www.fundecitrus.com.br Consulta: 18 de febrero 2022).

En Cuba, se demostró la eficacia de los antagonistas Trichoderma harzianum Rifai. A-34, T. harzianum Rifai. A-53 y Trichoderma viride Persoon. TS-3, en la inhibición del crecimiento in vitro de cepas de P. citricarpa. Estos resultados presentan gran relevancia pues los agentes de biocontrol ensayados constituyen la base para la formulación de bioproductos nacionales (TRICOSAVE 34, TRICOSAVE 53 y TRICOSAVE TS3), con probada efectividad contra hongos y oomicetos fitopatógenos. Adicionalmente, la acción sinérgica de los mecanismos detectados (competencia, antibiosis e hiperparasitismo), pudiera maximizar el control del agente causal de la MNC. La validación de estos resultados en condiciones de producción brindaría nuevas alternativas para el manejo integrado de la MNC en nuestro país (2323. Serra W. Caracterización de cepas de Phyllosticta citricarpa que afectan plantaciones citrícolas de Cuba. [Tesis de Maestría]. 2019. Universidad de La Habana, La Habana, Cuba. 62 pp., 5151. Quesada-Mola Y, Fernández-Gonzálves E, Casanueva-Medina K, Ponce-Grijuela E, Márquez-Gutiérrez ME. Actividad biológica de nuevas cepas cubanas de Trichoderma spp. efectivas en el control de Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood. RCCB. 2019; 7: 1-9. ISSN: 2307-695X.).