Los hemoplasmas o micoplasmas hemotróficos son bacterias de pequeño tamaño, desprovistas de pared celular, de característica pleomórfica, capaces de atacar la superficie y parasitar las células epiteliales de una amplia variedad de hospederos. Estos organismos ya fueron descritos infectando animales domésticos, salvajes y de laboratorio como bovinos, cerdos, ovinos, caprinos, ciervos, gatos, perros, monos, equinos, murciélagos y ratas (11. Messick JB, Berent L, Ehrhart EJ, Wasmer CC. Light and electron microscopic features of Eperythrozoon-like parasites in a North American opossum (Didelphis virginiana). J. Zoo Wild. Med. 2000; 31(2):240-243. DOI: 10.1638/1042-7260(2000)031[0240:LAEMFO]2.0.CO;2,22. Messick B. Hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas): a review and new insights into pathogenic potential. Vet. Clin. Pathol. 2004; 33 (1): 2-13. DOI: 10.1111/j.1939-165X.2004.tb00342.x). El agente etiológico de la hemoplasmosis porcina es Mycoplasma suis (M. suis), patógeno hemotrófico de vida extracelular, que se adhiere a la pared de los eritrocitos causando su deformación y lisis. Su diagnóstico se complejiza al ser un microorganismo no cultivable en medios artificiales lo cual hace que, en diversas ocasiones, sea subdiagnosticado (33. Biondo A, Dos A, Sá A, Vieira R, Vidotto O, Macieira D, Pereira N, Molento M, Timenetsky J, De H A, Diáz F, Messick J. A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil. Informe de investigación . Brasil: Rev. Bras. Parasitol. Vet. 2009; 18(3):1-7. DOI: 10.4322/rbpv.01803001).
La hemoplasmosis provocada por Mycoplasma suis es una enfermedad que puede cursar de forma aguda o crónica, la primera se manifiesta principalmente en lechones y se caracteriza por anemia, ictericia, fiebre con alta morbilidad y baja mortalidad; la segunda, es subclínica pudiendo presentar moderada ictericia y anemia en los recién nacidos, retardo en el crecimiento de los animales en engorde y baja ganancia de peso, así como una mayor predisposición a infecciones entéricas y respiratorias (44. Pintos M, Scodellaro C, Perfumo C, Posik D, Arauz, M. Infección por Mycoplasmas suis en el cerdo. Informe de investigación. Argentina: Analectavet. 2011; 31 (1) 40-46.).
La presencia de hemoplasmosis porcina en cerdos de la categoría reproductores, se asocia a fallas reproductivas tales como ciclos irregulares, anestro y fallas en la concepción, muerte embrionaria y abortos. Los cerdos pueden convertirse en portadores crónicos constituyen un problema desde el punto de vista epidemiológico y económico, ya que los animales permanecen asintomáticos durante meses y en algunos casos pueden no presentar ningún síntoma clínico (22. Messick B. Hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas): a review and new insights into pathogenic potential. Vet. Clin. Pathol. 2004; 33 (1): 2-13. DOI: 10.1111/j.1939-165X.2004.tb00342.x).
El Manual de Pruebas Diagnósticas para Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA, fundada como OIE), señala que el frotis o extendido sanguíneo teñido con Wright-Giemsa y los ensayos de ácidos nucleicos como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés Polimerase Chain Reaction) constituyen los ensayos a utilizar en la detección de este agente (55. OIE. Disponible en: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal_Health_in_the_World/docs/pdf/EQUINE_PRIOPLASMOSIS_FINAL.pdf. 2016. [Consulta: 21 Mayo 2019]. Organización Mundial de Sanidad Animal.). También la secuenciación de genes, con valor filogenético, se utiliza en los estudios de caracterización del agente y confirmación del diagnóstico (66. Hackett TB, Jensen WA, Lehman TL, Hohenhaus AE, Crawford PC, Giger U, Lappin MR. Prevalence of DNA of Mycoplasma haemofelis, ‟Candidatus Mycoplasma haemominutum, ‟ Anaplasma phagocytophilum, and species of Bartonella, Neorickettsia, and Ehrlichia in cats used as blood donors in the United States. Am. J. Vet. Res. 2006; (5):700-705. DOI: 10.2460/javma.229.5.700).
La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el estado de salud en cerdas de una unidad de producción de la provincia Mayabeque, Cuba, con antecedentes de afectación de los indicadores bioproductivos y reproductivos, específicamente los relacionados con disminución de la ganancia media diaria de peso, aumento en la repetición de celos, abortos e infertilidad. La selección de los animales, correspondiente a la categoría zootécnica de cerdas reproductoras, se realizó al azar. Se estudiaron 23 animales de la raza Yorkshire, en condiciones de crianza tecnificada, con manejo y alimentación controlada, según las normas de producción de la unidad.
Para el estudio hematológico la sangre se colectó a partir del seno venoso oftálmico, se depositó en tubos K2EDTA Vacutainer® (Becton Dickinson, Rutherford, NJ, USA) según las instrucciones del fabricante. Las muestras se homogenizaron cuidadosamente por inversión repetida y lenta tanto en el momento de su colecta, así como antes de su empleo (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.). Se determinó el valor de hematocrito por la técnica de microhematocrito en capilares. El conteo de leucocitos totales se realizó por cámara de Neubauer y el diferencial se realizó a partir del extendido sanguíneos teñidos con Giemsa, conteo de 100 células por microscopía óptica. Los valores de los parámetros hematológicos se analizaron según lo referido para la especie porcina por (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.,88. Jackson PGG, Cockcroft PD. Clinical examination of farm animals. Oxford: Blackwell Science; 2002. ISBN: 978-0-632-05706-1.); el valor del hematocrito se empleó como indicador de anemia.
Para detectar la presencia en los hematíes de formaciones o estructuras compatibles con hemoplasmas (ECHM), se realizó la técnica de extendidos sanguíneos (frotis sanguíneo), en el lugar del muestreo, individualmente, a partir de sangre periférica por punción de la vena marginal de la oreja, fijado con metanol y teñido con Giemsa.
El estudio de la serie roja en la categoría zootécnica de cerdas reproductoras evidenció en el 26,08 % de los animales (6/23) valores de hematocrito menores de 0,32 L/L, lo que es indicativo de un síndrome anémico.
El estudio de la serie blanca, mostró que el 47,8 % (11/23) de los animales presentaron valores inferiores a 11 x 109 c/L, considerado como leucopenia, mientras que el 4,3 % (1/23) mostró valores superiores a 22 x 109 c/L, indicativo de leucocitosis para la especie porcina según lo refieren (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.,88. Jackson PGG, Cockcroft PD. Clinical examination of farm animals. Oxford: Blackwell Science; 2002. ISBN: 978-0-632-05706-1.). La leucopenia estuvo motivada en el 54,5 % de los casos (6/11) por neutropenia y linfopenia absolutas, con valores inferiores a 3,1-10,5 x 109 c/L para neutrófilos y 4,3-13 x 109 c/L para linfocitos, respectivamente. El 36,3 % de los casos (4/11), presentaron neutropenia absoluta, y el 9,09 % (1/11) linfopenia absoluta. Estos resultados son compatibles con un patrón leucocitario inflamatorio (99. Anom. Eclinpath. Atlas. Cornell University College of Veterinary Medicine.2023. Hematology. https://eclinpath.com/atlas/), asociado a un proceso infeccioso sistémico.
De las 23 muestras de extendido de sangre que se analizaron en las cerdas, en el 65,21 % (15/23) se observó la presencia de estructuras cocoides intraeritrocitarias compatibles con hemoplasmas. En este sentido, los resultados se corresponden con lo descrito por Biondo et al. (33. Biondo A, Dos A, Sá A, Vieira R, Vidotto O, Macieira D, Pereira N, Molento M, Timenetsky J, De H A, Diáz F, Messick J. A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil. Informe de investigación . Brasil: Rev. Bras. Parasitol. Vet. 2009; 18(3):1-7. DOI: 10.4322/rbpv.01803001), quienes señalan que en poblaciones porcinas comerciales existe una alta prevalencia de Mycoplasma suis, especialmente en cerdas.
Se ha señalado que la manifestación clínica de la hemoplasmosis en los animales incluye desde la presencia de anemia grave hasta infección crónica asintomática. Los animales con infección aguda pueden evidenciar anemia hemolítica de leve, anemia hemolítica potencialmente mortal, anorexia, fiebre, ictericia e hipoglicemia, según la especie de hemoplasma involucrada (33. Biondo A, Dos A, Sá A, Vieira R, Vidotto O, Macieira D, Pereira N, Molento M, Timenetsky J, De H A, Diáz F, Messick J. A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil. Informe de investigación . Brasil: Rev. Bras. Parasitol. Vet. 2009; 18(3):1-7. DOI: 10.4322/rbpv.01803001). Los hemogramas reúnen las mediciones en los valores absolutos, porcentajes y agrega el aspecto morfológico de las tres líneas celulares (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.). Se ha planteado la importancia del hemograma como criterio para evaluar el estado de salud de los animales, herramienta de gran utilidad en la clínica y diagnóstico (1010. Iglesias I. Análisis de sangre: hemograma [en línea]. EEUU. 2015. Disponible en: http://www.amordemascota.com. [Consulta: 27 febrero 2016].).
Los resultados del estudio de la serie roja expuestos anteriormente indican la existencia de un elevado porcentaje de animales anémicos. La anemia se define como la reducción de la capacidad de la sangre para transportar oxígeno y se caracteriza por una disminución del hematocrito, hemoglobina y eritrocitos totales, se considera un signo clínico de enfermedad y los animales que la padecen manifiestan mucosas pálidas, debilidad, depresión, pérdida de peso, son raras las ocasiones en que se presenta de manera subclínica (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.). En este sentido, es importante destacar que la principal manifestación clínica de las infecciones por hemoplasmas es la anemia hemolítica extravascular, normocítica normocrómica (1111. Stadler J, Ade J, Hermanns W, Ritzmann M, Wentzel S, Hoelzle K, Hoelzle LD. Clinical, haematological and pathomorphological findings in Mycoplasma suis infected pigs. Veterinary Research. 2021; 17:214. DOI: 10.1186/s12917-021-02919-5,1212. Pintos M. Diagnóstico de Mycoplasma suis con técnicas convencionales y de biología molecular. Tesis de doctorado. 2016. http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/57061 [Consulta: 21 Mayo 2019]. ,1313. Sokoli A, Groebel K, Hoelzle K, Amselgruber WM, Mateos JM, Schneiner M, Ziegler U, Felder KM, Hoelzle LE. Mycoplasma suis infection results endothelial cell damage and activation: new insight into the cell tropism and pathogenicity of hemotrophic mycoplasma. Veterinary Research. 2013; 44(1):6. DOI: 10.1186/1297-9716-44-6).
En cuanto al comportamiento de le serie blanca, Stadler et al. (1111. Stadler J, Ade J, Hermanns W, Ritzmann M, Wentzel S, Hoelzle K, Hoelzle LD. Clinical, haematological and pathomorphological findings in Mycoplasma suis infected pigs. Veterinary Research. 2021; 17:214. DOI: 10.1186/s12917-021-02919-5), describen que en cerdos infectados por Mycoplasma suis se observa un incremento en el conteo de leucocitos entre los días 2-6 posinfección. Pasado este momento y coincidiendo con la presentación de los primeros signos clínicos a partir de los 7-8 días posinfección, el conteo de leucocitos totales muestra tendencia a la disminución. Sin embargo, Neves (1414. Neves N. Mycoplasma Suis Hemotrofico en el estado de Sao Paulo: Epidemiologia y Hematologia. Tesis. Universidad Estatal Paulista Julio de Mesquita Filho (Jaboticabal). 2019. [Consulta: 6 de octubre 2021]. https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7892053.), refiere que los parámetros hematológicos no reflejan el estado de infección por M suis. Por su parte, Stadler et al. (1515. Stadler J, Willi S, Ritzmann M, Eddicks M, Ade J, Hoelzle K, et al. Detection of Mycoplasma suis in pre-suckling piglets indicates a vertical transmission. BMC Vet Res. 2019;15(1):252. DOI: 10.1186/s12917-019-2001-y,1616. Stadler J, Ade J, Ritzmann M, Hoelzle K, Hoelzle LE. Detection of a novel haemoplasma species in fattening pigs with skin alterations, fever and anaemia. Veterinary Record. 2020;187(2):66–66. DOI: 10.1136/vr.105721. DOI: 10.1136/vr.105721) refieren que la comparación entre cerdas positivas y negativas a Mycoplasma suis, no mostró diferencias significativas en los parámetros hematológicos (eritrocitos, leucocitos, hematocrito, hemoglobina y conteo de trombocitos), a diferencia del estudio realizado en cerdos en crecimiento, donde los animales positivos mostraron un conteo de leucocitos totales significativamente superior. De manera general consideramos que los parámetros hematológicos, aunque están influenciados por varios factores, permiten una evaluación cuantitativa y cualitativa de componentes de la sangre, correcta interpretación del estado de salud y diagnóstico.
La importancia del análisis del frotis o extendido sanguíneo para el diagnóstico clínico se ha referido por diferentes autores (1717. Rodríguez F. Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. 2017. Disponible en: https://www.franrzmn.com/ [Consulta: Marzo de 2019].,1818. Kenneth S, Mahaffey E, Prasse K. Patología clínica veterinaria. 2004. 4aedición,1919. Campuzano-Maya G. Utilidad clínica del extendido de sangre periférica: los eritrocitos. Medicina & Laboratorio. 2008; 14: 311-357.). En el caso de los hemoplasmas, la observación de formas compatibles con hemoplasmas en extendidos de sangre sigue siendo el diagnóstico de rutina (33. Biondo A, Dos A, Sá A, Vieira R, Vidotto O, Macieira D, Pereira N, Molento M, Timenetsky J, De H A, Diáz F, Messick J. A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil. Informe de investigación . Brasil: Rev. Bras. Parasitol. Vet. 2009; 18(3):1-7. DOI: 10.4322/rbpv.01803001,2020. Yuan F, Tuanyuan S, Lihua X, Wei W, Fuzhuang L, Xuejuan Z, Xiufang Y, Junxing L, Jinhui LV, Weihuan F. Identification of a novel Hemoplasma species from pigs in Zhejiang province, China. 2017; 79(5): 864–870. DOI: 10.1292/jvms.16-0545).
En los animales que presentaron síndrome anémico el 66,6% (4/6) evidenció la presencia de estructuras compatibles con hemoplasmas (Figura 1), además se observó formación eritrocitaria de pilas de moneda, la que se consideran un hallazgo anormal (1717. Rodríguez F. Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. 2017. Disponible en: https://www.franrzmn.com/ [Consulta: Marzo de 2019].), que pudiera estar asociada al patrón leucocitario inflamatorio encontrado. Sin embargo, otros autores consideran que es típico encontrar estas formaciones en extendidos sanguíneos de la especie equina y porcina (77. Nuñez L y Bouda Jan. Patología clínica Veterinaria.2007 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. Anexo, pág. 331.,2121. Plasencia J. Clasificación morfológica eritrocitaria en cerdos (sus scrofa domesticus) aparentemente sanos en condiciones de altitud. Tesis de grado de Médico Veterinario Zootecnista. Universidad Politécnica Salesiana. Ecuador. 2022.).
Se ha señalado que el diagnóstico de hemoplasmas mediante la coloración de frotis sanguíneos con Wright o Giemsa es de gran utilidad para identificar a estos microorganismos, y fácil aplicación (2222. Tártara G, Pereyra N, Salvador F, González S. Detección de estructuras compatibles con mycoplasmas hemotróficos en extendidos sanguíneos de perros de la ciudad de Rosario, Argentina. Argentina. Veterinario Argentina. 2013; (30), 299.). Aspecto corroborado por (2323. Aguirre D, Thompson C, Neumann R, Salatin A, Gaido A, Deechaide, S. Clinical mycoplasmosis outbreak due to Mycoplasma ovis in sheep from Shalta Argentina: clinical microbiological and molecular diagnosis. Revista Argent Microbiol. 2009; (44), 1-5.), quienes refieren que la detección de los hemoplasmas se realiza, básicamente, a través de extensiones sanguíneas teñidas con colorante Giemsa.
La morfología de las estructuras observadas en los extendidos sanguíneos estudiados, son coincidentes con lo referido por diferentes autores, quienes indican que los micoplasmas hemotróficos pueden observarse en la periferia de los eritrocitos, en forma cocoides, bastones, anillo, en cadenas, tanto individuales o asociados en la superficie de los eritrocitos (2020. Yuan F, Tuanyuan S, Lihua X, Wei W, Fuzhuang L, Xuejuan Z, Xiufang Y, Junxing L, Jinhui LV, Weihuan F. Identification of a novel Hemoplasma species from pigs in Zhejiang province, China. 2017; 79(5): 864–870. DOI: 10.1292/jvms.16-0545,2323. Aguirre D, Thompson C, Neumann R, Salatin A, Gaido A, Deechaide, S. Clinical mycoplasmosis outbreak due to Mycoplasma ovis in sheep from Shalta Argentina: clinical microbiological and molecular diagnosis. Revista Argent Microbiol. 2009; (44), 1-5.). Aunque los hemoplasmas, en su mayoría, se encuentran unidos a los eritrocitos, en algunas ocasiones también pueden visualizarse en el plasma debido a la ruptura de los hematíes (33. Biondo A, Dos A, Sá A, Vieira R, Vidotto O, Macieira D, Pereira N, Molento M, Timenetsky J, De H A, Diáz F, Messick J. A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil. Informe de investigación . Brasil: Rev. Bras. Parasitol. Vet. 2009; 18(3):1-7. DOI: 10.4322/rbpv.01803001).
En el caso particular de la observación de estructuras compatibles con hemoplasmas, con independencia del valor incuestionable del frotis o extendido sanguíneo, existen varios factores que pueden afectar la sensibilidad diagnóstica. Los mismos incluyen calidad del extendido, coloración óptima y capacitación del personal (1919. Campuzano-Maya G. Utilidad clínica del extendido de sangre periférica: los eritrocitos. Medicina & Laboratorio. 2008; 14: 311-357.). Es fundamental identificar la presencia de artefactos en las extensiones sanguíneas, se describe que la presencia de artefactos debido a problemas con anticoagulante, tinción y cambios en la morfología celular se basa en el criterio de la apariencia y distribución dentro de la preparación, entre otros aspectos.
El manual de pruebas diagnósticas para animales terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA fundada como OIE), señala que el frotis o extendido sanguíneo teñido con Wright-Giemsa y el PCR constituyen los ensayos a utilizar en la detección de este agente (55. OIE. Disponible en: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal_Health_in_the_World/docs/pdf/EQUINE_PRIOPLASMOSIS_FINAL.pdf. 2016. [Consulta: 21 Mayo 2019]. Organización Mundial de Sanidad Animal.). Sin embargo, por la semejanza con los corpúsculos de Howell-Jolly así como por la presencia de precipitados durante la coloración esta técnica se considera por varios autores como poco confiable (2424. Acosta DB, Ruiz M, Sanchez JP. First molecular detection of Mycoplasma suis in the pig louse Haematopinus suis (Phthiraptera: Anoplura) from Argentina. Acta Tropica. 2019;194:165–8. DOI: 10.1016/j.actatropica.2019.04.007).
El hecho de encontrar estructuras compatibles con hemoplasmas debe elevar la percepción del riesgo sobre la posible presencia del patógeno. Los resultados expuestos en este trabajo constituyen un punto de partida para análisis posteriores, así como investigaciones encaminadas a la detección del patógeno mediante ensayos de PCR, desarrollo de formación especializada en patología clínica, estudios relacionados con el comportamiento de los signos clínicos, y factores riesgos asociados a las infecciones causadas por hemoplasmosis porcina entre otros aspectos.