Anticuerpo policlonal de conejo contra la proteína Erns para la detección del virus de la peste porcina clásica

José Miguel Fernández Torres, Yeosvany Cabrera Artiles, Onel Valdivia Pérez, María Teresa Barceló Avila, Daymí Abreu Remedios, Duniesky Martínez García, Joel Pérez Paz, Enrique Pérez Cruz, Raúl Armas Ramos

Resumen

La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad endémica en numerosos países. Una herramienta clave para la confirmación en laboratorio de la PPC es el diagnóstico diferencial entre cerdos vacunados y los que están realmente infectados. Muchos ensayos inmunoadsorbentes ligados a enzima (ELISA) están basados en la captura de anticuerpos en los sueros, pero estos ensayos no pueden utilizarse en aquellos animales que están persistentemente infectados. En tales casos, un ELISA de captura de antígeno podría ser una buena elección para diferenciar los animales vacunados de aquellos que están infectados. Con el objetivo de producir un anticuerpo policlonal que permita esta técnica, se inmunizaron dos conejos con proteína Erns recombinante. El anticuerpo fue conjugado a peroxidasa de rábano picante (HRP) y la dilución óptima de trabajo fue de 1:64 000 en un ELISA directo. Se evaluaron diferentes condiciones de recubrimiento para atrapar Erns recombinante en un ELISA y se concluyó que el recubrimiento a 10 μg/mL aseguraría mayor captura. En el ELISA se pudo detectar la Erns de una mezcla de sueros de cerdos vacunados con la cepa china del virus de la peste porcina clásica (VPPC). Además, no se observó reacción en sueros de animales sanos ni con sueros de animales vacunados con Porvac®, vacuna de subunidad basada en la glicoproteína E2. Se concluyó que el anticuerpo policlonal generado puede reconocer la proteína Erns viral en sueros porcinos y que podría ser utilizado en un ELISA sándwich para el diagnóstico de la PPC, en aquellos animales persistentemente infectados o inmunodeprimidos.

Palabras clave

anticuerpo policlonal anti-Erns; VPPC; ELISA

Referencias

Méndez LP. Obtention of a differential diagnostic system for Classical Swine Fever, M. S thesis, Center for Genetic Engineering and Biotechnology, Havana city, Cuba. 2010.

Blome S, Staubach Ch, Henke J, Carlson J, Beer M. Classical Swine Fever-An Updated Review. Viruses. 2017;9:86.

Moennig V. Introduction to classical swine fever: virus, disease and control policy. Vet Microbiol. 2000;73:93102.

Dewulf J, Koenen F, Mintiens K, Denis P, Ribbens S, de Kruif A. Analytical performance of several classical swine fever laboratory diagnostic techniques on live animals for detection of infection. J Virol Methods. 2004;119:137-143.

Prodanov J, Došen R, Valčić M, Petrović T, Pušić I, Maljković M, et al. Detection of Classical Swine Fever Virus in blood samples in experimentally infected piglets of different immunological status. Lucrări Stiinłifice Medicină Veterinară. 2009;42 (1):151-159.

Muñoz SG, Perez MS, Bohorquez M, Rosell JA, Summerfield R, Domingo AM, et al. Efficacy of a live attenuated vaccine in Classical Swine Fever Virus postnatally persistently infected pigs. Vet Res. 2015;46(1):78.

Oirschot JT. Vaccinology of classical swine fever: from lab to field. Vetmic. 2003;96:367-384.

Ferrer E, Fonseca O, Irian MP, Abeledo MA. La Peste Porcina Clásica en las Américas y el Caribe. Actualidad y Perspectivas de Control y Erradicación. Rev Salud Anim. 2010;32(1):11-21.

Lowry OH, Rosebrough J, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951;193-275.

Nakane PK, Kawaoi. Peroxidase-labeled Antibody: A New Method of Conjugation. J Histochem Cytochem. 1974;22(12):1084-1091.

Enlaces refback

  • No hay ningún enlace refback.