Criopreservación y almacenamiento de Mycoplasma spp.

Resumen

La criopreservación tiene como principio mantener la viabilidad y la funcionabilidad celular a temperaturas bajas, por lo que entender y aplicar adecuadamente la criopreservación del material biológico es fundamental en laboratorios y bancos de células. En el caso de los micoplasmas, el mantenimiento de cultivos viables no es solo una cuestión operacional, sino que constituye un factor esencial en el buen desempeño del trabajo en el laboratorio. Por tal motivo, este trabajo tuvo como objetivo evaluar la viabilidad de cepas de micoplamas conservadas, por congelación, en diferentes matrices y con varios agentes criopreservantes. Para el estudio se utilizó un cultivo de 5,1x108UFC/ml de Mycoplasma hyorhinis (seleccionado como cepa tipo), el cual se inoculó en matrices de cultivo celular y líquido ascítico. Ambos tipo de muestras se conservaron a -70ºC y -20ºC con o sin el empleo de agentes criopreservantes; en este caso, 5% de glicerol y 2.5% de dimetilsulfóxido. A los 3, 30, 60 y 90 días poscongelación se comprobó su viabilidad a través de la siembra en medio Hayflick líquido y sólido. Como resultado se obtuvo que en las matrices congeladas a -20ºC y -70ºC y con criopreservantes, Mycoplasma hyorhinis se mantuvo viable por un periodo de 90 días, no así en las matrices que no contenían criopreservantes: el comportamiento fue variable en dependencia de la temperatura. Se concluye que la adición de agentes criopreservantes (5% de glicerol o 2.5% de dimetilsulfóxido) preserva la viabilidad de los micoplasmas en las matrices estudiadas durante la congelación y el posterior almacenamiento; también la temperatura de -20ºC puede ser utilizada por aquellos laboratorios que carecen de equipamiento con -70ºC para la conservación de muestras por un periodo de tres meses, tiempo diseñado para estudios interlaboratorios.

Palabras clave: micoplasmas, criopreservación, almacenamiento, calidad, diagnóstico.