Desarrollo de PCR especie-específicos para la detección de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares

Anisleidy Pérez Castillo, Arianna Duque Ortiz, Yaima Burgher Pulgarón, Jose Antonio Agüero Fernández, Mario Sergio Solis Castells, Evelyn Lobo-Rivero

Resumen

La contaminación por Mollicutes en los cultivos celulares es frecuente. Especies como Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale y Acholeplasma laidlawii se identifican como causantes del 95 % de las contaminaciones. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar PCR especie-específicos para la identificación de las especies de micoplasmas contaminantes más frecuentes en cultivos celulares. Se optimizaron los parámetros críticos de la PCR y se determinaron la sensibilidad y especificidad analítica. Se estableció como valor óptimo de temperatura de hibridación 55ºC; concentración de magnesio 1,5 mM y de cebadores se seleccionó un rango 0,3-0,5 µM. La sensibilidad analítica de la PCR fue de 1 pg/µL, mientras que su especificidad analítica fue 100 %. Se realizó la PCR especie-específico a 58 muestras de cultivo celulares donde previamente se detectó la presencia de Mollicutes. Como resultado se detectó Mycoplasma orale como la especie más frecuente, seguida de Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis y Mycoplasma salivarium. Los resultados de este estudio confirman que los ensayos PCR especie-específicos desarrollados son factibles de emplear para la identificación de especies de micoplasmas en cultivos celulares.

Palabras clave

cultivos celulares; diagnóstico; micoplasmas; PCR

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