Vitrificación de embriones pre-implantatorios como método simple para la protección y generación de ratones transgénicos
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Resumen
La vitrificación de embriones y gametos es una novedosa alternativa para la protección ex situ y generación de ratones transgénicos. Un primer objetivo de este trabajo fue demostrar la efectividad de la vitrificación de embriones en 4-células con el propósito de conservar el genofondo de cuatro líneas de ratones transgénicos: 1) Ataxia, 2) Transferrina humana, 3) receptor CD46 y 4) ratones transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente (PVF); un segundo objetivo, fue obtener crías transgénicas a partir de embriones pronucleares vitrificados y modificados genéticamente por lentitransgénesis. En ambos experimentos fueron utilizados como grupo control embriones obtenidos de ratones no transgénicos. Los embriones en los estadios 4-células y pronucleares fueron obtenidos a las 55 h y 18 h post tratamiento superovulatorio, en cada caso. Los embriones colectados fueron vitrificados en sus correspondientes mezclas de DMSO, etilen glicol y sucrosa, y conservados en nitrógeno líquido hasta su uso. Post descongelación fue evaluada la supervivencia in vitro e in vivo en cada grupo experimental y se determinaron los principales daños citoestructurales que sufrieron los embriones. En el primer grupo experimental, los embriones vitrificados en estadio de 4-células, se logró una alta tasa de supervivencia embrionaria post descongelación en las cuatro líneas transgénicas (rango 91,5% a 100%). En el caso del desarrollo in vivo, no se observaron diferencias significativas en los porcentajes de crías nacidas viables entre las líneas transgénicas Ataxia 49,5%, Transferrina 47%, Receptor CD46 24,4% vs control vitrificado 38,3% (p<0,05), respectivamente). Como principales daños citoestructurales se observó la ruptura de la zona pelúcida y lisis de blastómeros, con porcentajes que difieren entre grupos. En el caso de los embriones pronucleares se obtuvo una tasa de desarrollo in vivo de 19,9% de crías viables (n=52 crías nacidas/ 266 embriones transferidos). De éstas un 25% de las crías obtenidas fueron transgénicas (n=13/52), para una eficiencia general por lentitransgénesis utilizando embriones pronucleares vitrificados de 4,5% (n=13/266). Los resultados obtenidos corroboran la efectividad de la vitrificación de embriones con fines de protección de genofondos y la generación de ratones modificados genéticamente por lentitransgénesis.
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