Molecular cloning and expression of a computationally predicted surface antigen of Mycoplasma gallisepticum

Abstract

ABSTRACT: Mycoplasmas, the simplest self-replicating organisms known, are distinguished phenotypically from other bacteria by their minute size and total lack of cell wall. The poultry industry is affected by several species of mycoplasmas, but Mycoplasma gallisepticum (MG) is the most economically significant one. The attachment of mycoplasmas to host respiratory epithelial cells constitutes a critical step in the pathway leading to infection and disease and is achieved by lipoproteins localized on the bacterial surface. In a recent in silico study, it was predicted a set of MG putative surface proteins with potential antigenic properties that could be used as candidates for exploring new vaccines, and for diagnostic tests as well. One of those potential candidates was the OppA. In this work we described the molecular cloning of the DNA segment that encodes a fragment of OppA, a polypeptide of 233 aa and about 30 kDa, as well as its expression, purification and immunogenic response induced by the product obtained.

Key words: Mycoplasma gallisepticum, surface protein, recombinant protein, IMAC purification.

CLONAJE MOLECULAR Y EXPRESIÓN DE UN ANTÍGENO DE SUPERFICIE DE MYCOPLASMA GALLISEPTICUM,

PREDICHO COMPUTACIONALMENTE

RESUMEN: Los micoplasmas son los organismos autoreplicativos más simples que se conocen, y que se distinguen de otras bacterias por su pequeña talla y la total carencia de pared celular. La industria avícola está afectada por varias especies de micoplasmas, pero Mycoplasma gallisepticum (MG) es el más significativo económicamente. La adherencia de los micoplasmas a las células epiteliales respiratorias del huésped, constituye un paso crítico en el camino que lleva a la infección y a la enfermedad, y se realiza mediante lipoproteínas localizadas en la superficie de la bacteria. En un estudio reciente in silico, se predijo la existencia de un grupo de posibles proteínas de superficie con potenciales propiedades antigénicas que podrían ser usadas como candidatas para explorar nuevas vacunas, así como pruebas diagnósticas. Uno de estos candidatos fue OppA. En este trabajo se describe el clonaje molecular de un segmento que codifica para un fragmento de OppA, un polipéptido de 233 aa y aproximadamente 30kDa, así como su expresión, purificación y la respuesta inmunogénica inducida por el producto obtenido.

Palabras clave: Mycoplasma gallisepticum, proteína de superficie, proteína recombinante, purificación por IMAC