Desarrollo de un ensayo de PCR dúplex para la detección de Salmonella spp. y Staphylococcus aureus en leche cruda

Resumen

En alimentos contaminados, los patógenos de mayor importancia asociados a enfermedades de transmisión alimentaria (ETA), que producen brotes gastrointestinales agudos, se encuentran Salmonella spp. y Staphylococcus aureus. La causa fundamental de esta contaminación es la deficiente higiene en la obtención y manipulación de los mismos. En alimentos como la leche y derivados lácteos, las ETA alcanzan hasta 6 %. El presente trabajo tuvo como objetivos optimizar y estandarizar un ensayo de PCR dúplex para la detección de Salmonella spp. y Staphylococcus aureus en leche cruda. El método se basa en la amplificación simultánea del gen yfiR para Salmonella spp. y ARNr 23S para Staphylococcus aureus. Se determinaron las propiedades termodinámicas de cada cebador y se optimizaron los principales parámetros críticos del ensayo. El PCR dúplex optimizado demostró ser específico para los microorganismos diana y el ensayo detectó valores de hasta 1 pg/µL de ADN y 10²ufc/mL en leche estéril. En el 46,7 % de las muestras de leche analizadas se detectó la presencia de S. aureus y no hubo muestra positiva a Salmonella spp. Los resultados sugieren que el PCR dúplex desarrollado es un ensayo sensible y específico para la detección simultánea de ambos patógenos en leche cruda.