Diversidad genética de Trichoderma spp. en Venezuela, determinada mediante análisis combinado ITS-AFLP

Daynet Sosa, Simón Pérez Martínez, Sandy Molina, Jhonny Demey Demey, Kelly Gómez, Diamarys Domínguez, María Istúriz, Raisa Rumbos, Dercy Parra

Resumen

Se estudió la diversidad genética entre 68 aislados de Trichoderma procedentes de diferentes cultivos, sustratos y localidades, mediante los análisis ITS-AFLP. Se secuenció la región ITS1-5.8S-ITS2 del ADN ribosomal amplificada con los cebadores ITS1 e ITS4 y en el caso de los AFLP se utilizaron cuatro combinaciones de oligonucleótidos. Las relaciones genéticas entre los aislados se analizaron mediante el uso combinado del Análisis de Coordenadas Principales, el Análisis de Conglomerados y el ajuste de un Biplot Logístico Externo sobre datos de disimilitud, utilizando los coeficientes de Jaccard, Emparejamiento simple, Dice y Rogers y Tanimoto. Se identificaron nueve especies y las más abundantes fueron Hypocrea lixii (anamorfoTrichoderma harzianum) y T. koningiopsis representadas por 22 y 20 aislados, respectivamente. Le siguen Hypocrea virens (anamorfo T. virens), Trichoderma ghanense; Trichoderma asperellum y Trichoderma brevicompactum con 7, 6, 4 y 4 aislados respectivamente. Las especies menos frecuentes fueron Trichoderma erinaceum con dos aislados y Trichoderma spirale y Trichoderma longibrachiatum con un aislado cada una. Los AFLP formaron cuatro grupos, correspondiendo uno de ellos al 99,52 % de los aislados de Trichoderma asperellum, otros dos agruparon al 85,54 y 50% de H virens y H. lixii, respectivamente. Las otras seis especies se ubicaron el cuarto grupo, y no pudieron ser diferenciadas entre si. El iniciador con mayor contenido de Información Polimórfica fue AG+CAG, que además permitió separar la especie H. lixii del resto. La combinación AG+CAG separó a T. asperellum de las otras especies.

Palabras clave: Trichoderma, ITS, AFLP, polimorfismo, control biológico.

GENETIC DIVERSITY DETERMINED BY ITS-AFLP ANALYSIS OF TRICHODERMA SPP. IN VENEZUELA

ABSTRACT: The genetic diversity among 68 Trichoderma isolates from different cultivars, substrates and localities was established by ITS-AFLP analysis. The ribosomal DNA region ITS1-5.8S-ITS2 was sequenced and amplified with the primers ITS1 and ITS4. In the case of AFLP, four oligonucleotide combinations were used. The genetic relationships between isolates were analyzed by the combined use of Principal Component Analysis, Cluster analysis, and the adjustment of an External Logistic Biplot over dissimilarity data using Jaccard, simple coupling, Dice and Rogers, and Tanimoto coefficients. Nine species were identified, and the most abundant were Hypocrea lixii (anamorf Trichoderma harzianum) and T. koningiopsis, with 22 and 20 isolates respectively. They were followed by Hypocrea virens (anamorf T. virens), Trichoderma ghanense; Trichoderma asperellum and Trichoderma brevicompactum, with 7, 6, 4 and 4 isolates, respectively. The least frequent species were Trichoderma erinaceum, Trichoderma spirale and Trichoderma longibrachiatum (2, 1 and 1 isolates, respectively). All the isolates clustered in four AFLP groups, with one containing 99,52% of T. asperellum, and the others with 85,54% and 50% of H. virens and H. lixii, respectively. The other six species grouped together in the four group, and were indistinguishable from one another. The most informative initiator was AG+CAG showing the greatest content of polymorphic information, and which additionally allowed discriminating H. lixii from the other isolates. AG+CAG combination clearly separated T. asperellum from the other species.

Key words: Trichoderma, ITS, AFLP, polymorphism, biological control.

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