Detección del virus de la poliedrosis nuclear (BmNPV) en el gusano de seda (Bombyx mori L.), mediante hibridación de ácidos nucleicos

Abstract

El gusano de seda de la morera, Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae), es afectado por numerosas enfermedades como la Grasserie, provocada por el virus de la poliedrosis nuclear (BmNPV). Su manejo y control se dirigen principalmente a la prevención y diagnóstico temprano. El objetivo de este trabajo estuvo encaminado al diagnóstico del virus BmNPV asociado a los síntomas de Grasserie, observados en las crías de gusano de seda en Cuba. Se desarrollaron los métodos de diagnóstico molecular basados en la hibridación radiactiva y no radiactiva de ácidos nucleicos, a partir de extracciones de poliedros de larvas del tercer y cuarto instar. En ambos métodos de hibridación se pudo detectar la presencia de BmNPV. En el caso de la hibridación radiactiva, se obtuvieron resultados positivos del 5,5% de las muestras analizadas del tercer instar, lo que coincide con los resultados de la hibridación no radiactiva. Sin embargo, en el cuarto instar se detectó el 28,8% de muestras positivas por hibridación radiactiva y 22,2% por la no radiactiva, del total de muestras analizadas. Aunque la hibridación radiactiva mostró más sensibilidad, ambos métodos permitieron confirmar que es posible detectar BmNPV a partir del tercer instar, lo cual permite establecer las  medidas de tratamiento preventivo y manejo de las crías para minimizar las pérdidas productivas.

Palabras clave: Bombyx mori, hibridación de ácidos nucleicos, virus de la poliedrosis nuclear, sericultura.

DETECTION OF NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS (BMNPV) IN SILKWORM (BOMBYX MORI L.) BY NUCLEIC ACID HYBRIDIZATION

ABSTRACT: The mulberry silkworm, Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) is affected by numerous diseases like Grassery, caused by the nuclear polyhedrosis virus (BmNPV). The management and control of these diseases mainly consist of prevention and early diagnosis. The objective of this work was aimed at the diagnosis of the virus BmNPV associated with the symptoms of Grassery observed in the production areas of the Mulberry silkworm in Cuba. Molecular diagnostic methods for BmNPV based on radioactive and nonradioactive hybridization of nucleic acids (HNA), from larvae’s polyhedra extractions in the 3rd and 4th instars, were developed. In both hybridization methods, BmNPV presence was detected. Positive results of 5.5% of samples analyzed in the 3rd larval stage were obtained using radioactive hybridization, which agreed with nonradioactive hybridization results. Nevertheless, in the 4th stage, 28.8% of positive samples were detected using radioactive hybridization and 22.2% of total analyzed samples for non-radioactive hybridization. Although radioactive hybridization showed higher sensibility, both methods allowed to confirm that it was possible to detect BmNPV from the 3rd larval stage, which allows to establish the enhancement of preventive treatment and management measures of mulberry litters with the objective of minimizing production loses.

Key words: Bombyx mori, nucleic acid hybridization, nuclear polyhedrosis virus, sericulture